色譜填充柱的填充劑是其中重要的部分,它通常是一種多孔吸附劑。填充劑的選擇根據(jù)所需的分析目標(biāo)和樣品特性來(lái)進(jìn)行。常用的填充劑包括吸附劑和分子篩。吸附劑是由高速液相色譜技術(shù)中吸附柱衍生而來(lái),它可以根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行選擇,例如常見(jiàn)的C18、C8和SiO2等。分子篩則是根據(jù)分子大小和形狀來(lái)選擇,如常用的葡萄糖胺、凱龍等。
填充柱中的填充劑具有大量的微小孔隙,這些孔隙可以吸附樣品中的化合物。當(dāng)樣品進(jìn)入填充柱后,填充劑表面的吸附作用會(huì)使得樣品分子附著在填充劑表面,從而被層析分離。不同的化合物具有不同的親合性和吸附能力,因此它們會(huì)以不同的速度通過(guò)填充柱進(jìn)行分離。對(duì)于非極性化合物而言,它們往往被填充劑較強(qiáng)烈地吸附,因此會(huì)持留更長(zhǎng)時(shí)間。而對(duì)于極性化合物而言,它們則往往很容易被填充劑釋放,因此會(huì)持留時(shí)間較短。
填充柱的柱壁是填充劑的載體,它可以有效固定填充劑并提供合適的通道用于樣品流動(dòng)。柱壁的材料通常是不會(huì)與樣品發(fā)生反應(yīng)的無(wú)機(jī)、有機(jī)材料,如玻璃、不銹鋼和聚酰胺等。柱壁的表面會(huì)被經(jīng)過(guò)表面處理,增加填充劑的附著能力,從而提高分離效率。
填充柱還通常包含一層保護(hù)層,用于保護(hù)填充劑的穩(wěn)定性和延長(zhǎng)柱的使用壽命。保護(hù)層可以是化學(xué)惰性物質(zhì)或具有特定的選擇性物質(zhì)?;瘜W(xué)惰性物質(zhì)例如聚硅氧烷,它可以減少填充劑與樣品之間的非特異性吸附。而具有選擇性物質(zhì)的保護(hù)層,例如卡賓或酸類聚合物,可以通過(guò)特殊的相互作用來(lái)選擇性地吸附和分離樣品中的特定化合物。
色譜填充柱的應(yīng)用主要包括以下幾方面:
1.可用于對(duì)復(fù)雜混合物進(jìn)行分離,如蛋白質(zhì)、核酸等,以獲取所需的目標(biāo)化合物。
2.通過(guò)對(duì)填充柱中樣品組分的峰面積或峰高進(jìn)行定量分析,可以確定樣品中目標(biāo)物質(zhì)的含量。
3.用于質(zhì)量控制,確保產(chǎn)品的一致性和穩(wěn)定性,如藥品質(zhì)量控制、食品安全等。
4.通過(guò)對(duì)填充柱中樣品組分的保留時(shí)間和峰形進(jìn)行分析,可以確定目標(biāo)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。
5.可以用于對(duì)復(fù)雜樣品的成分進(jìn)行分析,如環(huán)境樣品中有機(jī)物的分析。